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2013
6-18
如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基?
培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)??傊?,MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)"細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)"細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始,各種目的無(wú)血清培養(yǎng)AIMV(12005)培養(yǎng)基(SFM)。L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解,但是確切的降解率一...
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2013
6-18
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)時(shí)的樣品制備方法
(一)直接免疫熒光標(biāo)記法取一定量細(xì)胞(約1X106細(xì)胞/ml),在每一管中分別加入50μl的HAB,并充分混勻,于室溫中靜置1分鐘以上(),再直接加入連接有熒光素的抗體進(jìn)行免疫標(biāo)記反應(yīng)(如做雙標(biāo)或多標(biāo)染色,可把幾種標(biāo)記有不同熒光素的抗體同時(shí)加入),。孵育20-60分鐘后,用PBS(pH7.2—7.4)洗1-2次,加入緩沖液重懸,上機(jī)檢測(cè)。本方法操作簡(jiǎn)便,結(jié)果準(zhǔn)確,易于分析,適用于同一細(xì)胞群多參數(shù)同時(shí)測(cè)定。雖然直標(biāo)抗體試劑成本較高,但減少了間接標(biāo)記法中較強(qiáng)的非特異熒光的干擾,因...
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2013
6-18
影響ELISA試驗(yàn)效果常見(jiàn)分析,和解決思路
ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;2.手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是...
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2013
6-18
ELISA的精點(diǎn)摘要,不要錯(cuò)過(guò)奧
的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn),珠式、管式及磁性球ELSIA,國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用,兩者均有詳細(xì)的使用說(shuō)明,嚴(yán)格遵照規(guī)定操作,必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。4.1標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)...
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2013
6-18
免疫熒光制血樣品與視覺(jué)享受
一、原理(一)什么是熒光,簡(jiǎn)單地講,當(dāng)用一定波長(zhǎng)的光(如紫外光)照射某種物質(zhì)時(shí),經(jīng)過(guò)照射的物質(zhì)在極短時(shí)間內(nèi)即可發(fā)射出一種可見(jiàn)的光,這種光即為熒光。在生物中,由于產(chǎn)生熒光的方式不同,可以概括地歸納為以下幾種:1.自發(fā)熒光:在生物的某些組織中,經(jīng)紫外線照射后能直接發(fā)射出熒光的稱為自發(fā)熒光(或直接熒光)。如植物組織中的葉綠素,經(jīng)紫外線照射后,即可發(fā)出紅色熒光。2.次生熒光:有些生物組織經(jīng)紫外線照射后,并不能發(fā)出熒光,但是當(dāng)它吸收熒光染料后也可以產(chǎn)生熒光,這種稱為次生熒光(或間接熒光...
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2013
6-18
免疫組化實(shí)驗(yàn)的小竅門
1.固定:用4%的多聚甲醛固定液。對(duì)于冰凍切片,甲醛固定有時(shí)比冰凍丙酮好;但對(duì)于不同的組織和抗原,可選用不同的固定液。有時(shí)候商品化的抗體會(huì)有比較適合而推薦的固定液,請(qǐng)于購(gòu)置前注意說(shuō)明書(shū)。BouinS固定液:飽和苦味酸750ml,甲醛250ml,冰醋酸50ml,其對(duì)組織的穿透力較強(qiáng),固定較好,結(jié)構(gòu)完整,但因偏酸,對(duì)抗原有一定損害,且組織收縮明顯,不適于組織標(biāo)本的長(zhǎng)期保存。PLP液:即高碘酸鈉-賴氨酸-多聚甲醛,適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織,對(duì)超微結(jié)構(gòu)及許多抗原的抗原性保存...
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2013
6-18
酶聯(lián)方法的標(biāo)本收集與實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
臨床檢驗(yàn)常見(jiàn)的標(biāo)本一般包括血液(指血,靜脈血),尿,糞便,腦脊液,胸腹水,前列腺液,精液,陰道分泌物等,這些標(biāo)本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。(一)臨床標(biāo)本的收集A、血液標(biāo)本有些生理因素,如吸煙、進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)、情緒波動(dòng)、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化,有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾,以條件一致為宜,如無(wú)法避免,應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素。1.外周血一般選取左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)采血,該部位應(yīng)無(wú)凍瘡,炎癥,水腫,破損。如該部位不符合要求,以其他...
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2013
6-18
ELISA 方法的實(shí)驗(yàn)原理和操作過(guò)程.
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái),發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。(一)原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過(guò)洗滌除...
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2013
6-18
動(dòng)植物樣品的采集及DNA樣品的提取
動(dòng)物樣品的采集及處理方法遺傳學(xué)數(shù)據(jù)在野生動(dòng)物和圈養(yǎng)動(dòng)物的保護(hù)和管理中變得日益重要。在本文中,我們總結(jié)了一些能簡(jiǎn)便而有效地獲得樣品及數(shù)據(jù)的方法。我們?cè)诓杉瘶悠分?,?duì)將要進(jìn)行的遺傳學(xué)分析有所了解。然而,采集者并非都是研究者,當(dāng)采集地與實(shí)驗(yàn)室有相當(dāng)距離時(shí),采集者常常要保存好樣品直到有合適的接受者或存放地,這就要求采集者應(yīng)具備一定的經(jīng)驗(yàn)。首先,所有樣品均應(yīng)以個(gè)體序號(hào)進(jìn)行標(biāo)注,并且應(yīng)寫(xiě)上種名、性別、采樣者姓名以及采集日期,越詳盡越好,以便同一個(gè)體的不同類數(shù)據(jù)可以相互引用,另外,地理來(lái)...
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